培養(yǎng)液配制好后，裝入500mL容量的三角燒瓶中，每瓶裝量為100mL，并加工0～15粒小玻璃珠，加棉塞后再包扎牛皮紙封口，在1.5kg/cm2壓力下滅菌30分鐘，取出冷卻到30℃以下時，接入一塊約2平方厘米的斜面菌種，于23℃～25℃下靜置培養(yǎng)48小時，再置往復(fù)式搖床上振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為80～100次/分，振幅6cm～10cm。如果用旋轉(zhuǎn)式搖床，振蕩頻率為200～220轉(zhuǎn)／分。搖床室溫控制在24℃～25℃，培養(yǎng)時間因菌類不同而異，一般是在7天左右。培養(yǎng)結(jié)束的標準是：培養(yǎng)液清澈透明，液中懸浮著大量小菌絲球，并伴有各種菇類特有的香味。
一、液體菌種的檢驗方法
對液體菌種進行檢驗可采用感官檢查和取樣測驗相結(jié)合的方法。
1. 感官檢查 可采用“看、旋、嗅”的步驟進行檢查。
看：將樣品靜置桌上觀察。一看菌液顏色和透明度，正常發(fā)酵醪液呈黃色或黃褐色，清澈透明，菌絲顏色因菌種而異，老化后顏色變深；染雜菌的醪液則混濁不透明。二看菌絲形態(tài)和大小，正常的菌絲大小一致，呈球狀、片狀、絮狀或棒狀，菌絲粗壯，線條分明；而染雜菌后，菌絲纖細，輪廓不清。三看上清液與沉淀的比例，菌絲體占比例越大越好，較好的液體菌種，在瓶中所占比例可達80%左右。四看pH值指標是否變色，在培養(yǎng)液中加入甲基紅或復(fù)合指標劑，經(jīng)3～5天顏色改變，說明培養(yǎng)液pH值到達4.0左右，為發(fā)酵點；如果在24小時內(nèi)即變色，說明因雜菌快速生長而使培養(yǎng)液酸度劇變。五看有無酵母線，如果在培養(yǎng)液與空氣交界處的瓶壁上有灰色條狀附著物，說明為酵母菌污染所致，此稱為酵母線。
旋：手提樣品瓶輕輕旋轉(zhuǎn)一下，觀其菌絲體的特點。醪液的粘稠度高，說明菌種性能好；稀薄者表明菌球少，不宜使用。菌絲的懸浮力好，放置5分鐘不沉淀，表明菌種生長力強；反之，如果菌絲極易沉淀，說明菌絲已老化或死亡。再次觀其菌絲狀態(tài)，大小不一，毛刺明顯，表明是供氧不足；如果菌球縮小且光滑，或菌絲纖細并有自溶現(xiàn)象，說明污染了雜菌。
嗅：在旋轉(zhuǎn)樣品后，打開瓶蓋嗅氣味。培養(yǎng)好的優(yōu)質(zhì)液體菌種，均具有芳香氣味；而染雜菌的培養(yǎng)液則散發(fā)出酸、甜、霉、臭等各種異味。
2. 取樣測驗 可取液體菌種進行稱重檢查和粘度檢查；生長力測定和出菇試驗；化學(xué)檢查，包括測pH值、糖含量和氧含量等；顯微檢查，包括細胞分裂狀態(tài)觀察、普通染色和特殊染色等。
二、液體菌種的使用方法
液體菌種可作原種使用，也可作栽培使用。
1. 作原種 取一支100ml。獸用注射器，去掉針尖，換一根內(nèi)徑1mm～2mm，長100mm～120mm的不銹鋼鋼管，制成一個菌種接種器。使用前，洗凈接種器并用紗布包好，經(jīng)高壓蒸汽滅菌，冷卻后抽取液體菌種即可進行接種。<BR> 經(jīng)滅菌待接入菌種的原種瓶，先要在無菌條件下去掉棉塞，并改換無菌薄膜包扎瓶口。接種時，將針管插入瓶口上的薄膜，每瓶接種量為10mL～１5ml，要注意使液體菌種均勻分布在培養(yǎng)基表面，拔出針管后要立即用膠布貼封針孔，豎放在培養(yǎng)室的床架上進行培養(yǎng)。
2. 作栽培種或直接進行栽培 液體菌種在作栽培使用時，瓶栽的每瓶接種量為10mL～15mL；熟料袋栽的每袋接種量為，小袋10mL～15mL，大袋的20mL～30mL；開放式床栽的，每平方米接種量為500mL～1000mL，不需要接種針筒，可直接均勻灑在培養(yǎng)料面，或進行穴播。
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